蜂蜜由蜜蜂采集植物蜜腺分泌的汁液釀成，因其 含有豐富的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和藥用價(jià)值，越來越受到人們的 重視。我國(guó)的蜜蜂養(yǎng)殖史已有 2 000 多年，是世界上 第一養(yǎng)蜂大國(guó)。但是近年來由于工業(yè)排放、人為施 藥和不規(guī)范的生產(chǎn)加工流程等因素導(dǎo)致蜂蜜中抗生 素殘留問題嚴(yán)重，再加上主要貿(mào)易伙伴所設(shè)置的貿(mào)易 壁壘，嚴(yán)重影響了我國(guó)蜂產(chǎn)品的國(guó)際競(jìng)爭(zhēng)力。

API4000 液相色譜 － 質(zhì)譜儀，配有 電噴霧離子源( 美國(guó) AB 公 司) ; Oasis HLB SPE 柱( 500 cc，6 ml; 美國(guó) Waters 公司) ; 固相萃取裝置( 美 國(guó) Supelco 公司) ; 臺(tái)式離心機(jī)( 美國(guó) Thermo 公司) ; 自 動(dòng)氮吹濃縮儀( 美國(guó) Capiler Life Science 公司) ; 試管 振蕩器( 中國(guó)其林貝爾有限公司) ; CP225D 電子分析 天平( 德國(guó)) 。標(biāo)準(zhǔn)品: 鹽酸林可霉素( 純度 98% ，批 號(hào): 1501801) ; 羅紅霉素標(biāo)準(zhǔn)品( 純度 99． 7% ，批號(hào): 3051708) ; 甲醇( 色譜純，批號(hào): I685730321) ; 乙腈( 色 譜 純，批 號(hào): I0901407732 ) ; 甲 酸 ( 色 譜 純，批 號(hào): 73C1606TI) ; 三羥基氨基甲烷( Tris) ( 色譜純，批號(hào): M20418010) ; 無水氯化鈣( 分析純，批號(hào): 20180119) ; 實(shí)驗(yàn)用水由 Milli － Q 系統(tǒng)( 美國(guó) Millipore 公司) 制得。

蜂蜜樣品來自于江蘇省 5 個(gè)市 ( 淮安、宿遷、泰州、南京、蘇州) ，主要采集超市、農(nóng)貿(mào) 市場(chǎng)、網(wǎng)店等流通環(huán)節(jié)樣品。主要采集洋槐蜜、椴樹 蜜、棗花蜜等 10 種蜂蜜，共計(jì) 50 份樣品。

稱取 2． 0 g 蜂蜜試樣于 50 ml 離 心管中，加入 20 μl 1． 0 μg /ml 內(nèi)標(biāo)( 羅紅霉素) ， 加入 25 ml 0． 2 mol /L 三羥甲基氨基甲烷( Tris) 緩沖 溶液，振蕩混勻。Oasis HLB 固相萃取柱預(yù)先依次5 ml甲醇和 10 ml 活化。將待測(cè)液轉(zhuǎn)移至活化后的 Oasis HLB 固相萃取柱上，待樣液完全流出后，依次用 5 ml 水和 5 ml 甲醇 － 水( 2∶3，V /V) 溶液洗柱，棄去 全部流出液。減壓抽干 20 min，隨后用 5． 00 ml 甲醇 洗脫，收集洗脫液，在 40 ℃ 用氮?dú)鉂饪s至近干。用 1． 00 ml甲 醇 － 水 ( 3 ∶7，V /V) 溶 液 定 容，渦 旋 過 0． 22 μm濾膜，供液相色譜 － 質(zhì)譜/質(zhì)譜測(cè)定。

色譜柱: ACQUITY UPLC BEH C18 柱( 2． 1 mm × 50 mm，1． 7 μm) ; 柱 溫: 40 ℃。流動(dòng)相: 0． 1% 甲酸水溶液( A) ，甲醇( B) ， 采用的梯度洗脫: 0 min ～ 2 min，15% B; 2 min ～ 3 min， 80% B; 3 min ～ 5 min，80% B; 5 min ～ 6 min，15% B; 6 min ～ 10 min，15% B。流速: 0． 25 ml /min。進(jìn)樣體 積: 5 μl。離子源: 電噴霧離子源( ESI) ，正離子方式 ( ESI + ) 掃描，檢測(cè)方式為多反應(yīng)監(jiān)測(cè)( MＲM) 。離子 化電壓: 5． 5 kV; 離子傳輸毛細(xì)管溫度: 500 ℃ ; 氣簾 氣: 35 psi; 噴撞氣( 氮?dú)? : 12 psi; 噴霧氣: 45 psi; 輔助 加熱氣: 45 psi; 接口加熱: On。

準(zhǔn)確稱取 7 份不含林可霉 素的蜂蜜于 50 ml 離心管中，并分別加入不同體積的 林可霉素標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液，配制基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)系列，按本法 提取凈化后測(cè)定，采用 MultiQuant 軟件以定量離子對(duì) 的峰面積與內(nèi)標(biāo)物的比值進(jìn)行制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表 明，林可霉素在 1． 0 μg /L ～ 100 μg /L 濃度內(nèi)線性方程 為 y =0． 163 47x + 0． 146 86，相關(guān)系數(shù)為 0． 996。以信 噪比 S /N = 3 計(jì)算的檢出限為 0． 2 μg /kg，以信噪比 S /N =10 計(jì)算的定量限為 0． 7 μg /kg。

選用不含待測(cè)組分的蜂蜜進(jìn) 行 3 個(gè)濃度水平的添加回收實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明低濃度 ( 5 μg /kg) 下回收率為 107． 51% ，精密度為 4． 6% ; 中 濃度 ( 20 μg /kg) 下 回 收 率 為 100． 17% ，精 密 度 為 8． 6% ; 高濃度( 50 μg /kg) 下回收率為 92． 88% ，精密 度為 6． 8% 。

在全部 50 份樣品中，林 可霉素的檢出率為 24%，最大殘留量為 2． 998 μg /kg。 以我國(guó)對(duì)林可霉素的復(fù)檢要求判定( ＞ 50 μg /kg 需要 復(fù)檢) ，100% 的樣品合格。本次調(diào)查的蜂蜜品種有椴樹蜂蜜、枇杷蜂蜜和棗花蜜等 10 個(gè)品種，不同種類蜂 蜜林可霉素的檢出率和殘留量有差異，如椴樹蜜檢出 率為 25． 0% ，洋槐蜜檢出率為 14． 2% ，棗花蜜檢出率 為 33． 3% ，枇杷蜜檢出率為 0． 0% ，百花蜜檢出率為 42． 8%。

建立了蜂蜜中林可霉素的測(cè)定方法。本法操作 簡(jiǎn)單、靈敏，特異性強(qiáng)，經(jīng)實(shí)際樣品檢測(cè)表明，本法適 用于蜂蜜中林可霉素殘留的分析確證，為食品安全提 供可靠的確證檢測(cè)方法。



 

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